Questões de Aplicação e Execução de Técnicas Bacteriológicas Para o Diagnóstico das Doenças Infecciosas (Técnicas em Laboratório)

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Em um laboratório em que se trabalha com microrganismos de interesse ambiental, industrial, agrícola e em saúde, qual conjunto de procedimentos representa o fluxo indicado para isolamento, identificação e preservação de uma cepa-alvo obtida de amostra complexa (solo, alimento, efluente ou material clínico)?

  • A 1- PCR metagenômica direta da amostra sem cultivo; 2- Nomeação do microrganismo com base apenas na sequência parcial do 16S; 3- Preservação por subcultivo mensal em placas.
  • B 1- Inoculação direta em meio rico não seletivo para todas as amostras; 2- Identificação apenas por coloração de Gram e teste de oxidase; 3- Manutenção dos isolados em geladeira por tempo indeterminado.
  • C 1- Enriquecimento seletivo no substrato/condição-alvo; 2- Isolamento por estriamento em meio seletivo/diferencial; 3- Identificação polifásica; 4- Preservação por criopreservação em glicerol a -80°C ou liofilização.
  • D 1- Isolamento em meio contendo antibiótico de amplo espectro independentemente da espécie-alvo; 2- Identificação por painel bioquímico rápido; 3- Armazenamento em caldo nutritivo à temperatura ambiente.
  • E 1- Seleção por choque térmico para todas as matrizes; 2- Identificação exclusivamente por MALDI-TOF sem controle de pureza; 3- Preservação por congelamento doméstico sem crioprotetor.

Um microbiologista da Hemobrás está realizando o controle de qualidade microbiológico em uma amostra de solução utilizada na produção de hemoderivados. Para garantir a esterilidade do produto, foi realizada uma diluição seriada da amostra até a proporção de 1:1.000. Foram semeados 100 µL dessa diluição em uma placa de Petri com meio de cultura estéril. Após incubação a 37°C por 48 horas, foram observadas 30 Unidades Formadoras de Colônia (UFC). Considerando as boas práticas de controle microbiológico, a concentração de micro-organismos na amostra original é de

  • A 300 UFC/mL.
  • B 3.000 UFC/mL.
  • C 60.000 UFC/mL.
  • D 300.000 UFC/mL.

Assinale a afirmativa correta em relação às técnicas laboratoriais para a detecção de doenças infecciosas.

  • A As técnicas enzimáticas para detecção de doenças infecciosas, como por exemplo EIE (Ensaio Imunoenzimático) e ELISA (Ensaio Imunoadsorvente Ligado à Enzima), são técnicas para a detecção de antígenos de várias origens sendo a reação revelada por ação e uma enzima.
  • B Não existem equipamentos completamente automatizados para a realização de exames por técnicas enzimáticas visando a detecção de doenças infecciosas. Assim, esses métodos não são utilizados no laboratório clínico.
  • C As técnicas de imunofluorescência direta ou indireta não são adequadas para detecção de agentes infecciosos.
  • D As técnicas imunocromatográficas fornecem os resultados somente após 72 horas e apresentam elevada sensibilidade.
  • E As técnicas baseadas no conceito Point-of-Care (PoCT) para detecção de doenças infecciosas apresentam elevada frequência de resultados falso positivos e não devem ser utilizadas em crianças com suspeitas de infecção.

Os meios de cultura utilizados nos procedimentos de isolamento de microrganismos têm composições variadas que favorecem a seletividade do patógeno sob suspeita diagnóstica. O meio de cultura TCBS, indicado para o isolamento e cultivo adequado do Vibrio cholerae, deve apresentar o potencial hidrogeniônico:

  • A neutro em torno de 7,0
  • B alcalino em torno de 8,4
  • C levemente ácido em torno de 6,2
  • D extremamente ácido em torno de 3,8

O preparo correto do meio de cultura, das condições de incubação e o monitoramento de contaminação são essenciais para o cultivo e manutenção das culturas celulares.
Durante a rotina em um laboratório de cultivo celular, um técnico observa que a taxa de crescimento celular reduziu acentuadamente após várias passagens de uma cultura da linhagem HEK 293T, com a morfologia alterada.
Quais ações deveriam ser tomadas pelo técnico para investigar e resolver os problemas descritos?

  • A Diminuir a frequência de subculturas para evitar o estresse celular, permitindo que as células atinjam 100% de confluência antes de repicar.
  • B Ajustar a concentração de CO₂ para 95% para a melhoria do equilíbrio de gases dentro da incubadora.
  • C Aumentar a quantidade de tripsina utilizada durante a dissociação para garantir que todas as células sejam separadas de maneira eficaz, independentemente da morfologia celular.
  • D Verificar a possibilidade de contaminação bacteriana, fúngica ou por micoplasmas, realizando exames microscópicos e testes específicos.