Questões de Técnicas Bioquímicas Indicadas no Diagnóstico de Diversas Patologias Humanas (Técnicas em Laboratório)

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Uma pesquisadora deseja preparar uma biblioteca de DNA para realizar um sequenciamento genético utilizando a tecnologia de sequenciamento de próxima geração (NextGeneration Sequencing, NGS). O objetivo é garantir uma cobertura uniforme do genoma e minimizar vieses que possam impactar a análise. A pesquisadora deve tomar decisões sobre o protocolo de preparação de biblioteca. Assinale a alternativa que apresenta o passo correto e essencial para garantir a qualidade da biblioteca para NGS.

  • A Adicionar adaptadores ao DNA sem realizar a fragmentação prévia do material genético.
  • B Realizar a fragmentação do DNA em tamanhos uniformes e, em seguida, adicionar adaptadores específicos para o sequenciamento.
  • C Evitar a etapa de purificação, pois resíduos de reagentes não interferem no sequenciamento.
  • D Utilizar exclusivamente RNA como material inicial, mesmo que o objetivo seja sequenciar o DNA genômico.
  • E Realizar a amplificação da biblioteca com um número excessivo de ciclos de PCR para aumentar o rendimento final.

A proteômica baseia-se na identificação e quantificação de proteínas em amostras biológicas, muitas vezes por espectrometria de massas. Já a metabolômica foca nos metabólitos finais de processos celulares. A integração dessas abordagens permite uma compreensão mais completa do estado funcional de uma célula ou tecido, sendo especialmente útil em estudos que avaliam respostas a fármacos ou condições fisiológicas específicas. Qual das alternativas a seguir melhor descreve como a análise simultânea de proteoma e metaboloma pode fornecer informações mais completas sobre o impacto de um fármaco?

  • A A proteômica e a metabolômica fornecem informações redundantes, tornando desnecessária a análise combinada dessas duas abordagens em estudos farmacológicos.
  • B A metabolômica é mais relevante do que a proteômica para avaliar o impacto de um fármaco, pois os metabólitos refletem diretamente a ação do medicamento, sem influência da expressão proteica.
  • C A análise proteômica é suficiente para entender os efeitos de um fármaco, pois proteínas são os principais alvos da maioria dos medicamentos, dispensando a necessidade de análise metabolômica.
  • D A integração entre proteômica e metabolômica permite avaliar tanto as alterações nos níveis de proteínas quanto os efeitos metabólicos resultantes da interação com o fármaco, oferecendo uma visão mais abrangente da resposta biológica.
  • E A análise combinada de proteômica e metabolômica é limitada, pois apenas a genômica pode fornecer informações definitivas sobre a ação de um fármaco no organismo.

A quantificação precisa de proteínas antes da digestão e análise proteômica é essencial para garantir a reprodutibilidade dos experimentos e a comparabilidade entre amostras. Técnicas como Bradford, BCA e métodos espectrofotométricos permitem normalizar a quantidade de proteína utilizada, evitando variações que possam comprometer a detecção por espectrometria de massas. Além disso, a escolha de estratégias adequadas para fracionamento e depleção de proteínas pode impactar a identificação de proteínas de baixa abundância, tornando-se um passo crítico em abordagens proteômicas quantitativas. Dentre as alternativas a seguir, assinale aquela que melhor justifica a importância da quantificação proteica antes da digestão enzimática e análise proteômica.

  • A A quantificação proteica permite normalizar a concentração de proteína em cada amostra, reduzindo a variabilidade técnica e garantindo a comparabilidade entre diferentes condições experimentais.
  • B A quantificação proteica é útil apenas em amostras com proteínas de baixa abundância, sendo dispensável em casos de proteínas altamente expressas.
  • C O método de quantificação proteica não influencia diretamente os resultados da espectrometria de massas, pois a ionização dos peptídeos ocorre independentemente da concentração inicial de proteínas.
  • D A quantificação proteica deve ser evitada antes da digestão enzimática, pois compostos como reagentes de coloração podem interferir na espectrometria de massas.
  • E A quantificação proteica serve apenas para determinar a massa total de proteínas, sem impacto na eficiência da digestão enzimática ou na reprodutibilidade da análise proteômica.

Com base na espectroscopia de absorção na região do ultravioleta (UV) e visível (VIS), assinale a afirmativa correta.

  • A Em geral, a transição mais provável é do orbital ocupado de maior energia (HOMO) para o orbital desocupado de menor energia (LUMO).
  • B As transições eletrônicas observadas na espectroscopia UV-VIS ocorrem apenas entre orbitais do tipo sigma (σ) e orbitais antiligantes sigma estrela (σ*).
  • C A maioria das moléculas orgânicas incolores absorve fortemente radiação UV e VIS, tornando a espectroscopia de absorção essencial para sua identificação.
  • D A absorção de radiação UV e VIS em moléculas ocorre somente quando a energia fornecida ultrapassa 650 kJ/mol, promovendo um elétron para um estado excitado.

Na dosagem de glicose pelo método enzimático, a enzima que catalisa a primeira reação de oxidação da glicose é:

  • A Peroxidase
  • B Catalase
  • C Glicose oxidase
  • D Hexoquinase
  • E Amilase