O método de coloração de Gram é largamente utilizado na identificação microscópica de bactérias em amostras biológicas ou provenientes de placas de cultivo. Esta técnica, criada em 1884, passou por várias modificações importantes, como a
- A utilização de violeta de genciana no lugar da violeta de metila, que proporciona maior fixação nas bactérias gram-positivas e dá a coloração de fundo azul claro às lâminas.
- B substituição da fucsina fenicada (básica, insolúvel) pela safranina (ácida, solúvel), que permite melhor nitidez na visualização de bactérias gram-negativas.
- C adição da etapa de fixação da lâmina pelo calor, que favorece maior diferenciação entre as bactérias gram-positivas e as gram-negativas.
- D introdução do uso de diferenciador álcool-ácido (etanol/ácido acético), em proporções iguais, no lugar do álcool etílico 99,5 ºGL.
- E utilização de lugol como mordente do corante principal, que garante o não descoramento das bactérias gram-positivas durante a fase de diferenciação.